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产品

免疫细胞无血清培养基

    

      

免疫细胞无血清培养基

 

产品优势:

l  化学成份明确,完全不含任何动物来源的成份

l  严格按照cGMP标准生产,内毒素含量小于0.25EU/ml

l  培养性能优越,支持高密度单核细胞培养

 

产品应用:

l  DC细胞、CIK细胞和NK细胞的长期增殖培养

l  PBL细胞和TIL细胞的长期增殖培养

l  单核细胞和巨噬细胞的长期增殖培养

l  T淋巴细胞的长期增殖培养

 

产品货号:

名称

货号

规格

免疫细胞无血清培养基

M019

1000mL

 

保存条件:

28℃避光可保存14个月

 

操作步骤

以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则。如需在生物反应器或培养袋高密度培养,应优化条件来确定最佳的操作步骤。

T细胞培养:

1、准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC);或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序,在37°C的水浴,快速解冻(<1分钟)冷冻小瓶的外周血单个核细胞

2、用生理盐水洗涤细胞,根据需要也可加入25%的热灭活的的人自体血浆。

3、计数细胞可以使用电子(即Coulter计数器,VI-细胞)或手动的方法(即血球计数仪)。

4、离心细胞,清除洗涤缓冲液。

5、培养初期,用含细胞因子(如IL-2)的培养基重悬PBMCCD3+ T细胞密度保持在大约0.5-1×106/ mL。转移细胞到相应的细胞培养容器(培养袋、培养瓶)。随后可应用各种操作激活T细胞,包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小,细胞均可被隔离,激活和扩大。

6、在375CO2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中,在37°C5CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞,需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期,当细胞密度超过1×106/ mL时,需要分离传代,维持细胞密度在0.5-1×106/ mL(例如,2×106个细胞/ mL以上,按14比例0.5×106细胞/ mL)。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换,建议培养基深度不超过11.2厘米。

 

DC细胞培养:

1.       采集健康人外周血,肝素抗凝,以Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)

2.       用免疫细胞无血清培养基漂洗3次,调节细胞密度为1×106cells/mL

3.       放置375% CO2孵育箱中贴壁培养2h,去除未贴壁的细胞和培养基,加入适量的免疫细胞无血清培养基,建议细胞密度为1×106cells/mL

4.       加入rhIL-4(终浓度为500U/ml)和rhGM-CSF(终浓度为1000U/ml)到此培养基中,放置375% CO2孵育箱中继续培养。

5.       以后每隔2-3d半量换液,用含有rhIL-4(终浓度为500U/ml)和rhGM-CSF(终浓度为1000U/ml)的免疫细胞无血清培养基换液。

6.       在培养至第5d加入加入肿瘤抗原裂解物50μg/ml到此培养基中,刺激抗原特异性的DC细胞产生。

7.       在培养至第6d加入rhTNFα(终浓度为500U/ml)、rhIL-1β(终浓度为500U/ml)和rhIL-6(终浓度为500U/ml)到此培养基中。

8.       一般来说在细胞培养至第7d左右时,即诱导成为DC细胞。

 

CIK细胞培养:

1.       采集健康人外周血,肝素抗凝,以Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)

2.       用免疫细胞无血清培养基漂洗3次,调节细胞密度为1×106cells/mL

3.       贴壁培养2h,收集悬浮细胞用免疫细胞无血清培养基调节细胞密度为1×106cells/mL

4.       加入rhIFNγ(终浓度为2000U/ml),放置375% CO2孵育箱中培养24h

5.       加入rhIL2(终浓度为1000U/ml)和CD3McAb(终浓度为100ng/mL),放置375% CO2孵育箱中继续培养。

6.       以后每隔2-3d半量换液,用含有rhIL2(终浓度为1000U/ml)的免疫细胞无血清培养基换液。

7.       一般来说在细胞培养至第15d左右时,即诱导成为CIK细胞。

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